分子相互作用分析仪
内容简介
基于表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)分析测试与生物膜干涉技术(Biolayer Interferometry, BLI)分析检测为生物医药研发客户提供相应的分子互作分析测试服务,能够实现对蛋白,抗体及Fab片段等相互作用的定性定量分析,主要服务包括抗体筛选、表征、一致性评价以及生物大分子间相互作用等,助力于生物医药的发展。
SPR表面等离子共振是将一种生物分子(靶分子)偶联在生物传感器表面,再将含有另一种能与靶分子产生相互作用的生物分子(分析物)的溶液注入并流经传感器表面。分子间的结合引起传感器表面质量增加,导致折射指数按同样的比例增强,生物分子间反应的变化即被监测到。通过不同浓度梯度和温度梯度的分析物的注入,即可观察到分析物与靶分子的相互作用在分析物浓度或温度变化后引起的SPR角改变,进而可以绘制出两种分析物相互作用的SPR分子动力学曲线,计算出Kd 结合常数。SPR分子动力学技术已经成为目前定性和定量监测两种不同分子间结合程度的标准方法。
ForteBio Octet Red96e生物分子相互作用分析系统,该仪器采用生物膜干涉技术(简称BLI技术)实时提供高通量的生物分子相互作用信息。仪器发射白光到传感器表面并收集反射光,不同频率的反射光谱受到生物传感器的光膜层厚度的影响,一些频率的反射光形成了相长干涉(蓝色),而另一些受到了相消干涉(红色)。这些干涉被光谱仪所检测到,并形成一幅干涉光谱,并以干涉光谱的相位位移强度(nm)显示。因此结合到传感器表面的分子一旦有数量上的增减,光谱仪变会实时地检测到干涉光谱的位移,而这种位移直接反应出传感器表面生物膜的厚度,实现对生物分子与化合物相互作用高通量、快速、实时的检测。可检测生物分子的相互作用,包括抗体及小分子药物的亲和力和动力学测定、疫苗中某种微量蛋白的滴度鉴定、蛋白与蛋白的相互作用、核酸或反义核酸与蛋白的相互作用分析等。具有无需对样品分子进行标记、灵敏度高、适用范围广的特点。
主要应用:
1. 浓度测定:抗体浓度检测,非抗体蛋白、病毒浓度检测,类似ELISA方法开发,pg~mg/mL的检测范围;
2. 动力学检测:KD、Koff、Kon,快速定性检测;
3. 多分子相互作用:协同作用、竞争作用。
蛋白印迹实验(Western blot)
Western blot实验介绍:
Western,也称Western blot、Western blotting、Western印迹,是用抗体检测蛋白的重要方法之一。检测材料或者药物对某个信号通路上蛋白靶点的影响,检测对细胞内某个特定蛋白的表达量。首先通过凝胶电泳将不同分子量大小蛋白进行分离,后续利用特异性抗体识别一定分子量大小的目的蛋白。
技术服务路线
*可以从上述任意步骤开始定制您的实验
上图为通过Western blot检测细胞内蛋白的表达情况
蛋白表达与纯化
蛋白表达系统是由外源基因、辅助片段、载体和宿主组成的体系,通过这个体系可以实现在体内或者体外进行蛋白质的合成。
科学指南针能为客户提供各类重组蛋白的表达服务。拥有各类成熟稳定的表达平台(细菌、昆虫、哺乳动物、酵母和无细胞表达体系),能够提供基因合成及优化、载体构建、蛋白表达条件优化、蛋白表达小试与纯化、蛋白大量生产以及下游活性检测和蛋白结构解析等服务。所制备的重组蛋白可用于生物、化学、医学、食品药品、环境与材料等领域的科学研究。
需要您提供:
目的蛋白相关信息及其基因序列或蛋白序列;
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表达体系、表达质粒及表达条件;
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获得蛋白的用途和研究目的;
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需要获得的蛋白量及纯度。
蛋白结构模拟
蛋白质是具有特定氨基酸序列的生物大分子,是基因表达的产物,也是细胞中行使功能的单位,对蛋白的序列、结构和功能的解析有助于了解其在生命体内的作用机制。
蛋白质结构分为4个层次
初级结构:蛋白质的氨基酸序列
二级结构:如α-螺旋和β-折叠片
三级结构:蛋白质折叠的三维构想
四级结构:蛋白质各亚基的空间排布及互作
蛋白质的结构测定通常有X射线晶体衍射技术、核磁共振波谱技术和冷冻透射电子显微镜技术,而通过实验测定的结构数据不足以描述蛋白质复杂的结构,因此通过计算模拟的方法来预测蛋白质的结构信息具有重要意义,也是实验数据的重要补充和验证。
蛋白质动态构象模拟的最常用的计算方法是分子动力学,其中同源性建模(homology modeling)在预测该未知蛋白精细结构方面会发挥非常大的作用,其结果可以帮助研究者了解目标蛋白的结构性质,并可用于药物筛选、发现某种疾病的潜在治疗药物,或者研究靶标与药物的相互作用模式等。
同源建模的流程:
(1)搜索与靶蛋白序列相关的已知蛋白三维结构。将靶蛋白序列与PDB中的所有蛋白序列进行比对,找出序列相似的结果;
(2)挑选模板,将得到的相似结果作为潜在的模板,一般来说对于具有同源蛋白的序列(同源性大于30%),需要选择一个或多个合理的结果作为模板。